2022年7月7日，中華人民共和國海關總署發(fā)布了2022年第57號公告（關于發(fā)布《進境種用雛禽指定隔離檢疫場建設規(guī)范》等90項行業(yè)標準的公告），其中《梨波氏盤菌果腐病菌檢疫鑒定方法》SN/T 5467-2022自2023年2月1日起實施，本文對該行業(yè)標準進行解讀。
一、什么是梨波氏盤菌果腐病菌？
梨波氏盤菌果腐病菌Potebniamyces pyri是一種危害蘋果、梨等植物的病原菌，除了引起果樹樹皮的潰瘍或壞死外，還可以引起儲藏期梨果的腐爛病，據(jù)美國提供材料，該有害生物是美國梨上新發(fā)現(xiàn)的收獲后有害生物。該病目前分布于德國、英國、烏克蘭、俄羅斯、塞浦路斯、加拿大、美國的俄勒岡州和華盛頓州等地，中國無分布，在美國華盛頓州發(fā)生最為嚴重，給當?shù)乩娴纳a(chǎn)帶來了嚴重的經(jīng)濟損失。2004年，Xiao等人對華盛頓州d'Anjou梨儲藏期病害的調(diào)查結(jié)果表明，梨波氏盤菌腐爛病是梨果儲藏期腐爛病的重要組成部分，大約有30%的梨腐爛病是由P. pyri引起的。該菌一旦傳入我國，將給我國的梨產(chǎn)業(yè)帶來嚴重影響。本實驗室在2013年首批進境的美國梨中分離到該病菌，但由于其與其他弱寄生菌復合侵染的特性，經(jīng)歷了長時間的分離純化培養(yǎng)，才鑒定出該病菌。亦由于它的復合侵染特性，在檢疫過程中非常容易被忽略，發(fā)生漏檢的現(xiàn)象，因此研發(fā)其相應的檢測方法或通過查閱已報道文獻進行方法驗證，以形成梨波氏盤菌果腐病菌的檢測的推薦性方法，并形成包括分離培養(yǎng)、檢測技術、基本信息介紹在內(nèi)的《梨波氏盤菌果腐病菌檢疫鑒定方法》的行業(yè)標準，對于我國口岸對于該病菌的檢疫工作具有重大意義。
二、該標準的適用范圍：
本標準規(guī)定了梨波氏盤菌果腐病菌的檢疫鑒定方法。
本標準適用于進境鮮梨、蘋果及相關寄主植物產(chǎn)品攜帶的梨波氏盤菌果腐病菌的檢疫鑒定。
三、如何檢測梨波氏盤菌果腐病菌？
1.癥狀觀察：仔細檢查果蒂、果萼及果實表面是否有腐爛病斑、菌絲、分生孢子器等。
2.病菌的分離、純化及形態(tài)觀察：果實樣品，采用進行 75 % 酒精表面擦拭消毒，快速過火，切開去表皮，在病健交界處取樣，切成 4 × 4 mm 小塊。置于 PDA 平板上，20 ℃ 條件下 20 d 后進行分生孢子器觀察。
3.PCR 檢測：采用引物 ITS1/ITS4 可擴增出約 550 bp的特異性條帶，Bt-LEV-Up4 / Bt-LEV-Lo1 擴增后可得到 664 bp的條帶，將條帶回收測序，進行 Blast 比對，應與Potebniamyces pyri的序列同源性達 99 % 以上。
四、該標準的特點：
1. 方便、快速，操作簡便
本標準建立了梨波氏盤菌果腐病菌的分離培養(yǎng)方法和分子生物學檢測方法，是典型的傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定與分子生物學鑒定相結(jié)合的病原真菌鑒定方式，通過方法的建立，可指導口岸一線人員快速對疑似目標物進行定性，大大縮短了無標準方法時的大量摸索工作。
2. 廣泛適用性
該方法所涉及的檢測方法及設備均為口岸實驗室常規(guī)設備，操作簡便、快捷，技術難度不高，且可同批次處理大量樣品。為口岸實驗室在進境植物產(chǎn)品中的檢測工作提供了便捷。
